SOB培养基(配制量：1L)

SOB培养基(配制量：1L)

█组分

●配制

1.配制250mM KCl溶液。在90ml的去离子水中溶解1.86g KCl后，定容至100 ml。

2.配制2M MgCl2 溶液。在90ml去离子水中溶解19g MgCl2后，定容至100ml，高温高压灭菌。

3.称取下20g Tryptone、5g YeastExtract 和0.5g NaCl，置于1L烧杯中。

4.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

5.量取10ml 250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2ml），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1L。

8.高温高压灭菌后，4℃保存。

9.使用前加入5ml灭菌的2MMgCl2溶液。

▲注意

1.Tryptone与Yeast Extract易吸潮，称量后立即密封试剂瓶，精准把控各成分用量，尤其是NaCl（0.5g），避免浓度偏差影响菌体生长。

2.pH调节需缓慢操作，滴加NaOH后充分混匀再复核，灭菌后pH轻微偏移（≤±0.1）不可二次调节；KCl溶液加入后需搅匀，避免局部浓度过高。

3.MgCl2需在培养基使用前无菌添加，严禁提前加入后共灭菌（高温易导致镁离子沉淀），加药全程超净台内操作，防止杂菌污染，混合后避免剧烈震荡。