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█组分
组分 | CAS | 浓度 |
Tryptone | 91079-40-2 | 1.2%（W/V） |
YeastExtract | 8013-01-2 | 2.4%（W/V） |
Glycerol | 56-81-5 | 0.4%（W/V） |
KH2PO4 | 7778-77-0 | 17mM |
K2HPO4 | 7758-11-4 | 72mM |
Ampicillin | 69-53-4 | 0.1mg/ml |
IPTG | 367-93-1 | 0.024mg/ml |
X-Gal | 7240-90-6 | 0.04mg/ml |
Agar | 9002-18-0 | 1.5%（W/V） |
●配制
1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4和0.72M K2HPO4)100ml，溶解2.31gKH2PO4和12.54g K2HPO4于90ml的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100ml，高温高压灭菌。
2. 称取12g Tryptone、24g YeastExtract和4ml Glycerol，置于1L烧杯中。
3. 加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，加入15gAgar。
5. 高温高压灭菌后，冷却至60℃保存。
6. 加入100ml的上述灭菌磷酸缓冲液，1mlAmpicillin（100mg/ml）、1mlIPTG（24mg/ml）、2mlX-Gal（20mg/ml）后均匀混合。
7. 铺制平板（30～35ml培养基/90mm培养皿）。
8. 4℃避光保存。
▲注意
1. 5N NaOH具强腐蚀性，需戴手套、护目镜，逐滴慢加并搅拌，pH计校准后再测，微调至所需值。
2. 添加剂需在-20℃储存，X-Gal全程避光；仅在培养基冷却至60℃时添加，用无菌移液管，防交叉污染。
3. 铺板与储存：培养皿提前紫外线消毒30分钟以上，除尽气泡；平板凝固后倒置存放，严防冷凝水污染。
