█组分
基于30% Acrylamide(29:1)、5×TBE 缓冲液、10% 过硫酸铵(APS)、TEMED 配制,含 3.5%、5%、8%、12%、20% 五种胶浓度规格。
●配制
1.按配方量表精准量取 H2O、30% Acrylamide、5×TBE,置于洁净烧杯中,低速混匀(避免气泡)。
2.加入对应体积 10% APS,快速混匀;临灌胶前加入 TEMED,立即轻轻颠倒混匀(聚合反应即刻启动,需快速操作)。
3.将混合液缓慢注入电泳胶板间隙,插入梳子,室温(25℃)静置 30–60 min 至完全聚合。
4.聚合完成后小心拔梳,用 1×TBE 冲洗加样孔,去除未聚合残留,备用。
▲注意
1.丙烯酰胺为神经毒性物质,操作全程戴手套、口罩、护目镜,避免皮肤接触或吸入粉尘;聚合后毒性降低,仍需规范操作。
2. 10% APS 需现配现用(或 4℃保存≤1 周),TEMED 开封后密封 4℃避光保存;试剂失效会导致凝胶聚合失败。
3. 室温<20℃可适当增加 APS/TEMED 用量,>30℃减少用量,防止聚合过快开裂或过慢不完全。
4. 小片段核酸(<500 bp)选 12%–20% 胶,大片段(>10 kb)选 3.5%–5% 胶,按需选择适配浓度。